天疱疮的检查

证明IgG（或IgA天疱疮中的IgA）抗体直接作用于角质形成细胞表面，是诊断天疱疮的金标准。通过对这些抗体的检测，来区分天疱疮和其它水疱大疱性或脓疱性疾病。证明天疱疮自身抗体的方法包括直接IF、间接IF、免疫沉淀、免疫印迹和酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosbent assay ,ELISA）。

直接IF检测患者的皮肤或黏膜，为了证明沉积在角质形成细胞表面在体结合的IgG抗体。其标本应当从皮损周围的正常皮肤或黏膜处取得。直接IF是所有类型天疱疮最可靠和敏感的诊断方法。但是，细胞表面非特异性染色偶尔会出现在其他皮肤病中，如海绵水肿性皮炎、烧伤、中毒性表皮坏死松解、系统性红斑狼疮和扁平苔藓，或抗体直接抗血液A和B组的患者。如果直接IF结果为阴性，天疱疮的诊断应当受到严重的质疑。将近100%的活动期寻常型天疱疮、落叶型天疱疮和副肿瘤性天疱疮患者存在IgG的沉积。不存在IgM的沉积，但有时还可见到IgA的沉积。补体（C3）的沉积不是必需的，可能因为IgG的主要亚型为IgG4，而IgG4并不与补体结合。IgA天疱疮中，可以检测到角质形成细胞表面存在IgA的沉积（而非IgG的沉积）。

间接IF检测患者的血清，为了证明循环中存在直接作用于上皮细胞表面的IgG抗体（见图1）。作为间接IF染色的底物，猴食道用于检测寻常型天疱疮（抗Dsg3抗体）时更敏感，正常人皮肤或豚鼠食道用于检测落叶型天疱疮（抗Dsg1抗体）时更好。大鼠膀胱用于检测副肿瘤性天疱疮（抗斑蛋白抗体）。除了少数疾病早期局限性或处于疾病缓解期的患者外，大多数天疱疮患者存在抗上皮细胞表面的循环IgG抗体，并可通过间接IF检测到。尽管寻常型和落叶型天疱疮涉及的抗原不同，但是直接或间接IF得到的染色模式是相似的，这就使得两种疾病在血清学上很难区分（比较图1B和C）。免疫沉淀、免疫印迹和ELISA可以用于证明这些抗体靶向作用的分子。

免疫沉淀和免疫印迹是通过电泳分离出特定分子量的蛋白条带来检测靶抗原的。免疫印迹需要将蛋白底物变性，但免疫沉淀不需要。所以，当检测与三维结构依赖性抗原表位（空间结构性抗原表位）作用的抗体时，免疫沉淀比免疫印迹更好，而免疫印迹所检测的抗体，其作用的抗原表位是即使经过变性仍能保留下来的（线性抗原表位）。但是免疫印迹更容易操作，因为免疫沉淀需要放射性同位素标记蛋白底物。

近期的一个新项目是将抗原特异性的ELISA用于天疱疮的诊断[9-10]。将患者的血清放在经重组Dsg1或Dsg3蛋白包被的板子上进行ELISA检测。这样就可以检测出直接抗Dsg1或抗Dsg3的特异性抗体。检测者可以通过此方法在血清学上鉴别寻常型和落叶型天疱疮这两个亚型。如果血清抗Dsg1结果阳性而抗Dsg3为阴性，则提示落叶型天疱疮的诊断。如果抗Dsg1为阴性而抗Dsg3为阳性，则提示黏膜主导型寻常型天疱疮的诊断。如果抗Dsg1和抗Dsg3都为阳性，则提示黏膜皮肤型寻常型天疱疮的诊断）。而且ELISA的评分出现与疾病活动程度平行波动，并有利于监测病情的活动、制定皮质类固醇减量的计划、在临床表现出现前预测疾病的反复和复发。